PRUEBA DE LA COAGULASA
Objetivo: permite separar S. aureus, que posee
coagulasa, de las otras especies de estafilococos que genéricamente se las
denomina estafilococos coagulasa negativos (ScoN).
Fundamento: S. aureus posee dos tipos de
coagulasa:
a) Una endocoagulasa o coagulasa ligada o clumping
factor, que está unida a la pared celular. Esta actúa directamen te sobre
el fibrinógeno provocando la formación de coágu los o grumos cuando se mezcla
una suspensión bacteriana con plasma citratado (test en lámina).
b) Una exocoagulasa o coagulasa libre que actúa
mediante la activación de un factor sérico (CRF), formándose un complejo
coagulasa-CRF, el cual reacciona con el fibrinógeno pro duciéndose un coágulo
de fibrina (test en tubo). Mientras el test en tubo es definitivo, el test en
lámina nos sirve como una rápida y económica técnica de tamizaje (screening).
Entre un 10 a 15% de las cepas de S. aureus se mostrarán negativas en el
test en lámina, por lo cual en esos casos se hace necesario realizar un test en
tubo.
• Test en lámina
Procedimiento: se emulsionan sobre un
portaobjetos una o más colonias en una gota de suero fisiológico hasta formar
una suspensión lechosa. Luego se agrega, al lado, una gota de plasma citratado
de conejo y se mezclan. Interpretación de resultados: debe realizarse dentro de
los primeros diez segundos. Un test positivo se evidencia por la formación de
grumos. Los test negativos deben ser confirmados por test en tubo.
• Test en tubo Procedimiento: se
emulsionan varias colonias en un tubo con 0,5 ml de plasma citratado de conejo.
Se incuba a 35 ºC y se chequea la formación del coágulo a las 4 horas. Si es negativo
se reincuba toda la noche y se procede a su lectura a las 18 horas. La lectura
a las 4 horas es fundamental porque en alguna oportunidad puede suceder que las
fibrinolisinasde S. aureus lisen el coágulo luego de 18 horas de
incubación y de esta manera se produzcan un test falso negativo.
Interpretación de resultados: se observa la formación de un coágulo
total o parcial si el test es positivo.
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